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哺乳動物細胞基因編輯

CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)的出現(xiàn)為哺乳動物模型構(gòu)建提供了簡便、快速的方法，也為基因疾病的治療提供新思路、新方法。泓迅生物繼質(zhì)粒DNA后全新推出CRISPR RNP介導(dǎo)的細胞基因編輯服務(wù)：平臺依托先進的技術(shù)和經(jīng)驗豐富的科研團隊，為您打造從方案設(shè)計、sgRNA設(shè)計及化學(xué)合成、高活性重組Cas9蛋白，RNP復(fù)合物組裝到敲除細胞系構(gòu)建的全流程服務(wù)。

服務(wù)優(yōu)勢

全模式物種CRISPR sgRNA設(shè)計
sgRNA化學(xué)合成純度高達99%以上
重組Cas9蛋白純度高達99%以上
最快至2周交付

服務(wù)詳情

服務(wù)項目	交付內(nèi)容	交付周期
方案設(shè)計	專業(yè)的分析報告設(shè)計序列	咨詢
合成與組裝	化學(xué)合成修飾化的sgRNA 高活性、高純度的Cas9蛋白 RNP復(fù)合物組裝	咨詢
細胞系構(gòu)建	多克隆細胞群或單克隆細胞株提供細胞基因型復(fù)檢、擴增及凍存	咨詢
驗證	DNA水平檢測蛋白水平檢測	咨詢

在線咨詢

服務(wù)流程

案例分享查看詳細

1、利用RNP下的雙sgRNA編輯法，實現(xiàn)基因DNA水平片段敲除

案例：對X細胞的A基因進行Exon1-13的片段敲除（KO）
（1）在需求敲除片段兩端分別設(shè)計1條高靶向的sgRNA序列，如下圖：

（2）將gRNA-A1、gRNA-A2進行化學(xué)修飾合成后分別與Cas9蛋白組裝成RNP，轉(zhuǎn)染至X細胞進行A基因片段序列敲除；

（3）敲除結(jié)果檢測如下：
DNA水平-Sanger測序顯示，A基因序列已被敲除，結(jié)果如下：

細胞表型檢測如下圖：A為正常細胞，B為A基因敲除后的突變細胞形態(tài)，表明A基因被敲除。

RNP基因敲除

2、RNP敲除效率遠超傳統(tǒng)質(zhì)粒法

案例：以AAVS1位點敲除為例，比較質(zhì)粒（DNA）與RNP的敲除效率
（1）將AAVS1-sgRNA1序列構(gòu)建帶有Cas9的載體中，轉(zhuǎn)染細胞后提取基因組DNA，以基因組DNA為樣本進行Sanger測序并結(jié)合Synthego ICE分析軟件檢測，結(jié)果顯示敲除率為14%；

（2）將AAVS1-sgRNA1 RNP復(fù)合物轉(zhuǎn)染細胞后進行如（1）所述檢測，結(jié)果顯示敲除效率為69%；

RNP敲除效率

（3）敲除效率比較（如下圖），結(jié)果顯示RNP敲除效率是質(zhì)粒法的4-5倍，顯著高于質(zhì)粒法。

3、采用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)，實現(xiàn)片段敲入

案例：在X細胞中敲入功能標(biāo)簽
1）針對目標(biāo)基因區(qū)域設(shè)計了一條高特異性gRNA，位于待插入?yún)^(qū)域附近，有助于提高敲入效率。gRNA經(jīng)化學(xué)修飾后與Cas9蛋白復(fù)合形成RNP，用于電轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)染。
2）供體載體經(jīng)優(yōu)化設(shè)計，包含同源臂、功能標(biāo)簽、篩選標(biāo)記和可移除元件，以實現(xiàn)對目標(biāo)位點的高效同源敲入。